Chuẩn bị Mueller-Hinton agar

(Vui lòng trích dẫn nguồn nhut-biotech.blogspot.com nếu chia sẻ)
 Mueller-Hinton agar là môi trường tăng trưởng vi sinh vật thường được sử dụng trong phương pháp khuếch tán kháng sinh cho các chủng Neisseria và Moraxella.Môi trường chứa hỗn hợp dịch chiết động vật (thường là bò), tinh bột, các casein giúp cho hầu hết các vi sinh vật phát triển.

Thành phần:

- 30% dịch chiết thịt (300gr/liter)

- 1.75% casein hydrolysate (17.5gr/liter)

- 0.15% tinh bột (1.5gr/liter)

- 1.7% agar (17gr/liter)

Chỉnh pH đến 7.3±0.1 ở nhiệt độ 25⁰C

Các pha:

1. Chuẩn bị các thành phần của MHA hoặc mua dạng bột bán ngoài thị trường.
2. Hấp khử trùng, để nguội còn khoảng 45⁰C tới 50⁰C trong nước.
3. Phân phối ra các đĩa petri với liều lượng 60-70mm/đĩa 15x150mm hoặc 25-30mm/đĩa 15x100mm sao cho độ dày xấp xỉ 4mm
4. Để môi trường khô tự nhiên
5. pH của môi trường nên nằm trong khoảng 7.2-7.4. Đừng cố điều chỉnh pH nếu nằm ngoài khoảng này.
6. Đặt các đĩa trong túi nhựa, ủ ở 4⁰C tới khi sử dụng.

Kiểm tra chất lượng

1. Sử dụng chủng chuẩn E. coli QC nuôi cấy trong 18-24 giờ trên đĩa MHA ở 35^-37⁰C với ~5% CO₂ (hoặc với đèn cầy).
2. Để kiểm tra vô trùng, tiến hành ủ chung với 1 đĩa đối chứng trong 48 giờ 35^-37⁰C với ~5% CO₂ (hoặc với đèn cầy).

Điều kiện đạt được:

-          Chủng E. coli phải mọc

-          Sau 48h, đĩa đối chứng vẫn không bị nhiễm

Chuẩn bị môi trường MHA với 5% máu cườu hoặc ngựa

1. Tiến hành tương tự như pha môi trường MHA cho tới bước 2
2. Bổ sung máu cừu (hoặc máu dê) tiệt trùng vào môi trường với nồng độ 5%.
   1. - Điều chỉnh pH của môi trường nằm trong khoảng 7.2 - 7.4. Lưu ý: Đừng cố điều chỉnh pH nếu pH nằm ngoài khoảng này.
   2. - Tiến hành phân phối ra đĩa petri có đáy phẳng, đặt trên mặt bàn phẳng để độ dày thạch là đồng nhất (4mm). Thường thì đổ 60-70ml môi trường đối với hộp 150mm đường kính, 25-30ml đối với hộp có đường kính 100mm.
   3. - Để môi trường khô tự nhiên sau đó tiến hành bảo quản trong túi nhựa, để tủ lạnh, dùng trong vòng 2 tuần.

Kiểm tra chất lượng

1. Nuôi cấy chủng chuẩn S. pneumoniae hoặc N. meningitidis QC trong 18-24 giờ trên đĩa MHA ở 35^-37⁰C với ~5% CO₂ (hoặc với đèn cầy).
2. Để kiểm tra vô trùng, tiến hành ủ chung với 1 đĩa đối chứng trong 48 giờ 35^-37⁰C với ~5% CO₂ (hoặc với đèn cầy).

Điều kiện đạt được:

-          S. pneumonia xuất hiện khuẩn lạc nhỏ, xám hoặc xanh xám xung quanh quầng sang xanh riêng biệt.

-          N. meningitidis xuất hiện khuẩn lạc lớn, tròn, mượt, sáng và lồi có màu xám giống như trên BAP

-          Sau 48h, đĩa đối chứng vẫn không bị nhiễm

 TÀI LIỆU THAM KHẢO

1. World Health Organization, Laboratory methods for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae, 2011.